【藥品名稱】
通用名稱：人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名稱：Diagnostic Kit for Antibody to Human Immunodeficiency Virus (ELISA)
漢語(yǔ)拼音：Renlei Mianyi Quexian Bingdu Kangti Zhenduan Shijihe ( Meilianmianyifa)
【包裝規(guī)格】
96人份/盒
【預(yù)期用途】
用于血液的篩查和臨床HIV病毒感染的輔助診斷。
【檢驗(yàn)原理】
采用EIA雙抗原夾心法檢測(cè)，在預(yù)包被有HIV抗原的反應(yīng)孔內(nèi)加入待測(cè)標(biāo)本，若標(biāo)本中有抗-HIV，則可在微孔板表面形成抗原-抗體復(fù)合物，再與酶標(biāo)抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)顯色系統(tǒng)顯色后，根據(jù)OD 值判定有無(wú)HIV抗體的存在。
【主要組成成份】
1、HIV抗原包被板 96孔×1塊
2、酶結(jié)合物 12ml×1瓶
3、HIV-1陽(yáng)性對(duì)照 1.0ml×1瓶
4、HIV-2陽(yáng)性對(duì)照 1.0ml×1瓶
5、陰性對(duì)照 1.0ml×1瓶
6、濃縮洗滌液：用前每瓶1:20稀釋 50ml×1瓶
7、顯色劑A 6ml×1瓶
8、顯色劑B 6ml×1瓶
9、終止液 6ml×1瓶
10、封板膠紙 2片
11、說(shuō)明書 1份
【儲(chǔ)存條件及有效期】
2～8℃避光保存12個(gè)月。
【適用儀器】
1、微量移液器和潔凈的吸頭
2、37℃恒溫箱或水浴箱
3、計(jì)時(shí)器
4、洗板機(jī)
5、振蕩器
6、酶標(biāo)儀 檢驗(yàn)波長(zhǎng)450nm，參考波長(zhǎng)630nm
【樣本要求】
1、樣本采集不需要特殊準(zhǔn)備，按照正常的采血技術(shù)收集血液，全血樣品最好先放置37℃靜置2小時(shí)，再將血樣品充分離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘以上，使血清或血漿不含或極少含血細(xì)胞。如果為抗凝血樣品，應(yīng)將血樣品充分離心后，最好再放置室溫2小時(shí)以上。
2、樣本可使用血清或血漿，檸檬酸、肝素或EDTA等抗凝劑不會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。
3、樣本中含疊氮鈉會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果，高度溶血的樣本，沒完全收縮的血清樣本或微生物污染的樣本可能會(huì)引起錯(cuò)誤的結(jié)果。
4、新鮮的樣本在2～8℃無(wú)菌條件下可保存一星期，可長(zhǎng)期儲(chǔ)存在-20℃或以下，避免反復(fù)凍融。
【檢驗(yàn)方法】
1、每次試驗(yàn)設(shè)陰性兩孔、HIV-1陽(yáng)性對(duì)照和HIV-2陽(yáng)性對(duì)照各兩孔，分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl，再設(shè)一孔空白對(duì)照，其余孔加入100μl被測(cè)樣本，置37℃溫育60分鐘。棄去孔內(nèi)樣品，扣干。
2、洗板：
1）手工洗板：棄去反應(yīng)板條孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干；用洗滌液注滿每孔，勿溢出，靜置5～10秒，棄去孔內(nèi)洗滌液，拍干，如此反復(fù)5次，拍干。
2）洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，洗液應(yīng)注滿每孔，并確保每次吸凈無(wú)殘留，最后在吸水紙上拍干。
3、每孔加酶結(jié)合物100μl（空白對(duì)照孔不加），置37℃溫育30分鐘，同上法洗反應(yīng)板5次。
4、每孔加顯色劑A液、B液各50μl，輕輕振蕩后，37℃避光靜置30分鐘。
5、 每孔加入終止液50μl終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀數(shù)，可選擇 450nm（以空白孔校零）或雙波長(zhǎng)450/630nm，讀取各孔OD值。讀數(shù)須在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
【參考值】
1、試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求HIV-1陽(yáng)性對(duì)照和HIV-2陽(yáng)性對(duì)照平均值均大于1.20，陰性對(duì)照平均值小于0.10，陽(yáng)性、陰性對(duì)照OD值之差應(yīng)大于1.20，否則本次試驗(yàn)無(wú)效。
2、若陰性對(duì)照讀數(shù)小于0.05時(shí)，按0.05計(jì)算。
3、臨界值（Cut off value）=陰性對(duì)照平均值+0.10。
4、測(cè)試標(biāo)本的OD值小于臨界值則為HIV抗體陰性。
5、測(cè)試標(biāo)本的OD值等于或大于臨界值則為HIV抗體陽(yáng)性。（注意：初試陽(yáng)性標(biāo)本應(yīng)重新取樣進(jìn)行雙孔復(fù)試，復(fù)試陽(yáng)性者應(yīng)按“全國(guó)艾滋病檢測(cè)管理規(guī)范”送HIV確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)）。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1、陰性結(jié)果表明樣本中不含有抗-HIV，或樣本中的抗-HIV含量低于試劑盒的檢測(cè)范圍。
2、陽(yáng)性結(jié)果表明樣本中含有抗-HIV，或非特異反應(yīng)素。
3、陽(yáng)性結(jié)果的樣本需要再進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，只有經(jīng)過(guò)重復(fù)或再重復(fù)試驗(yàn)仍為陽(yáng)性結(jié)果的樣本，可認(rèn)為是HIV陽(yáng)性。所有重復(fù)結(jié)果為陽(yáng)性的樣本應(yīng)經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)氖侄芜M(jìn)行確認(rèn)。
陽(yáng)性結(jié)果的樣本如復(fù)檢為陰性結(jié)果應(yīng)被認(rèn)為是陰性樣本。重復(fù)不出陽(yáng)性結(jié)果可能屬于下列一個(gè)或多個(gè)技術(shù)問(wèn)題引致：
1） 由于儀器或加樣器造成的交叉污染。
2） 顯色劑被金屬離子污染。
3） 由于試劑滴漏造成的交叉污染。
4） 不充分的洗板或最后吸去不徹底。
【試驗(yàn)方法的局限性】
本品僅用于檢測(cè)血清或血漿中抗-HIV，用于臨床人類免疫缺陷病毒感染的輔助診斷。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1、檢測(cè)HIV抗體國(guó)家陰性參考品，應(yīng)符合要求。
2、檢測(cè)HIV抗體國(guó)家陽(yáng)性參考品，應(yīng)符合要求。
3、用6份HIV抗體國(guó)家最低檢出限參考品，陽(yáng)性反應(yīng)不得少于3份，且基質(zhì)血清為陰性。
4、用1份HIV抗體國(guó)家精密性參考品進(jìn)行檢定，CV(%)應(yīng)不高于15%(n=10)。
5、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：試劑各組分置37℃至少6天，檢定結(jié)果應(yīng)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。
【注意事項(xiàng)】
1、 本品僅用于體外診斷，僅限于檢測(cè)人體血清、血漿；檢測(cè)結(jié)果作為診斷指示之一。
2、 從2～8℃條件下取出的樣本應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)行檢測(cè)。
3、 須確保樣品加樣量的準(zhǔn)確，如果加樣不準(zhǔn)確，可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的試驗(yàn)結(jié)果。
4、 使用微量移液器手工加樣時(shí)，應(yīng)每次更換吸頭吸取樣本。
5、 在操作過(guò)程中應(yīng)盡量避免反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。
6、 濃縮洗滌液系高濃度磷酸鹽，可能會(huì)形成結(jié)晶，如未完全溶解，會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果，同時(shí)可能會(huì)堵住自動(dòng)加樣器或洗板機(jī)管道。若出現(xiàn)結(jié)晶，請(qǐng)放置37℃充分溶解，然后稀釋混勻使用。
7、 封板膠紙不能重復(fù)使用。
8、 用水浴鍋時(shí)，請(qǐng)將反應(yīng)板浸放于水中1/3，底部以網(wǎng)格支撐物支撐，水溫控制在37℃。
9、洗板：
1）以洗板機(jī)洗板時(shí)，洗板機(jī)的加液量至關(guān)重要，既避免洗液過(guò)量溢出，又能充滿反應(yīng)微孔中，洗板次數(shù)不應(yīng)該少于5次，并經(jīng)常注意檢查加液頭是否堵塞。
2）手工洗板時(shí)，請(qǐng)勿使用帶紙屑的吸水材料拍板，以防外源性過(guò)氧化物酶類似物或氧化還原物質(zhì)與顯色劑發(fā)生反應(yīng)，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3）洗板時(shí)所用的吸水紙請(qǐng)勿反復(fù)使用。
4）洗板機(jī)最好在每次使用前、后，用蒸餾水或去離子水清洗干凈，以防止管道堵塞或腐蝕。
10、如使用全自動(dòng)酶標(biāo)分析系統(tǒng)，可能會(huì)存在系統(tǒng)的誤差，應(yīng)對(duì)系統(tǒng)參數(shù)設(shè)定做適當(dāng)調(diào)整，以滿足國(guó)家相關(guān)質(zhì)控品要求。
11、如果有任何試劑接觸皮膚和眼睛，必須用大量清水對(duì)該部位進(jìn)行擴(kuò)大清洗和消毒；終止液為硫酸，具有腐蝕性。
12、試劑盒內(nèi)有關(guān)組份及臨床樣本均視為有潛在傳染性，請(qǐng)按相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范來(lái)執(zhí)行和處理。
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